为探讨化学杂交剂SQ-1诱导的小麦生理型雄性不育系花药绒毡层细胞凋亡过程与花粉粒败育的关系,以小麦生理型雄性不育系及其可育系花药为试验材料,结合前期绒毡层细胞凋亡研究的结果,采用透射电镜超微观察花药绒毡层细胞结构,定量检测与凋亡相关的天冬氨酸蛋白酶相关基因(APs1、APs2、APs3)的表达量,同时利用含明胶的十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳技术对天冬氨酸蛋白酶活性进行验证。结果表明,在小麦花药发育单核期,生理型雄性不育系花药绒毡层细胞较可育系绒毡层细胞提前降解;在四分体至三核时期,3个天冬氨酸蛋白酶基因在不育和可育系中均表现为先升高后降低的趋势,且单核期表达量最高;天冬氨酸蛋白酶相关基因(APs1、APs2、APs3)在花药发育单核时期以及四分体时期,不育系较可育系均明显上升;天冬氨酸蛋白酶活性研究表明,在花药发育各时期该酶活性在不育系与可育系中均表现出明显差异,且在不育及可育系花药中天冬氨酸蛋白酶活性都呈先升高后降低的趋势,在二核期活性达到最高。表明在SQ-1诱导的生理型不育系中,天冬氨酸蛋白酶的变化与绒毡层细胞凋亡、结构变化及雄性不育花粉粒败育密切相关。本研究初步揭示了生理型小麦败育的机理,为进一步深入研究小麦雄性不育机理,培育能广泛应用于生产实践的优良不育系提供了一定的理论依据。
苹果腐烂病菌是引起我国苹果腐烂病的主要病原真菌,对苹果产业造成了严重的经济损失。为有效控制病害的发生,本试验研究了VmHMG对苹果腐烂病菌的生长发育及致病性的影响。本研究通过融合PCR技术将苹果腐烂病菌HMG-box基因上下游片段与及潮霉素筛选标记基因Hpt片段,构建敲除载体,利用聚乙二醇(PEG)介导的原生质体转化,再经潮霉素初筛、PCR扩增和Southern杂交验证,最终从95个转化子中得到2株敲除突变体Δ1-5、Δ2-22,敲除效率为2.1%。与野生菌株相比,Δ1-5、Δ2-22在菌落颜色、子实体产生等方面没有发生明显变化;突变株平均生长速率分别下降了10.8%和19.8%,但致病性分别增加了48.5%和56.2%。由此可知,VmHMG基因缺失抑制了苹果腐烂病菌的生长,增强了其致病性,对其他性状影响不明显。本研究通过获得VmHMG基因敲除突变体,初步分析了该基因的功能,为明确病菌的生长发育及致病作用机制奠定了理论基础。
为获得肉制品中牛、羊、猪、鸡、鸭等动物源性成分的快速高效多重PCR检测方法,利用5对牛、羊、猪、鸭和鸡等动物源性成分特异性PCR引物(靶基因序列来源于线粒体基因组),对多重PCR反应条件引物浓度和退火温度进行优化,并确定该检测方法的检出限。结果表明,多重PCR方法最佳反应条件为鸭源特异性引物浓度0.12 μmol·L-1,鸡源特异性引物浓度0.16 μmol·L-1,猪源特异性引物浓度0.16 μmol·L-1,羊源特异性引物浓度0.32 μmol·L-1,牛源特异性引物浓度0.24 μmol·L-1,退火温度58℃,dNTPs浓度0.20 mmol·L-1,Taq DNA聚合酶添加量5 U,循环次数40。在最佳反应条件下,所建立的牛、羊、猪、鸡和鸭等5种动物源性成分多重PCR的gDNA检出限达到20 pg。应用优化后的多重PCR方法对21份市售肉制品样本进行盲样检测,验证鉴别方法的准确性,结果与现行标准的检测结果一致,掺假率达42.86%。本试验结果为肉制品中该5种动物源性成分的快速检测提供了技术支撑。
为探究发芽对大豆氨基酸总量及游离氨基酸组成、含量的影响,采用全自动氨基酸分析仪和高效液相色谱-二级质谱联用仪分别对大豆贮藏态,浸泡6 h,萌芽1、2、3、4、5、6、7 d的总氨基酸及游离氨基酸进行定量测定,分析氨基酸的变化规律。结果表明,经发芽处理,大豆中总氨基酸含量略有提高,其中发芽7 d时,天冬氨酸总含量增加了1.24倍,谷氨酸总含量减少了25.30%;游离氨基酸总量提高了9.36倍,每种游离氨基酸含量均有不同程度提高;游离必需氨基酸总量增加了20.86倍,游离必需氨基酸占游离氨基酸总量的比值提高了1.07倍。由此可知,发芽有助于提高大豆的营养和感官品质,本试验结果为发芽大豆产品的开发提供了一定理论支撑。
农药剂型改良和施用方法研究已成为农药开发与应用中的重点之一。为探究亲水凝胶包覆(HGE)农药的安全性,以HGE-乙草胺为研究对象,探究其除草活性;同时,利用放射性同位素示踪技术,比较了HGE-14C-乙草胺和原药14C-乙草胺在玉米幼苗中的吸收分布、残留和生物富集规律的异同性。结果表明, HGE-乙草胺对杂草的EC90为0.293 μg ai·g-1,低于田间推荐乙草胺浓度的下限(0.373 μg ai·g-1),表现出较高除草活性,但与原药相比,HGE-乙草胺的除草活性在一定程度有所降低;玉米幼苗对HGE-乙草胺及其原药的吸收量均较小,且对前者的吸收显著低于后者(P<0.05),其吸收量分别为引入量的3.60%和4.04%(处理后15 d),HEG处理可降低乙草胺在玉米体内的残留;玉米幼苗地上部对HGE-乙草胺活性成分的生物富集系数(9.98)显著低于原药(12.35)。与原药相比,田间使用HGE-乙草胺可能对玉米生长更安全。本研究为HGE-乙草胺的合理使用提供了基础数据,并为深入了解HGE型农药的安全性提供了科学依据。